Inżynieria genetyczna 6.15.BTI-IG
Realizowane zagadnienia: Charakterystyka enzymów używanych w inżynierii genetycznej. Enzymy restrykcyjne. Mikromacierze DNA. Uszkodzenie (nokautowanie) genu. Interferencja RNA. Schemat klonowania i izolacja rekombinowanego klonu. Podstawowe wektory klonujące, pBR322, fag λ , fag M13. Transgeniczne zwierzęta i rośliny. Budowa, konstrukcja i izolacja rekombinowanych wektorów. Wektory ekspresyjne, budowa i regulacja ekspresji genu.Mutageneza ukierunkowana. Detekcja i analiza sklonowanych genów i ich produktów, hybrydyzacja kwasów nukleinowych (Nothern, Southern blotting), immunodetekcja białek (Westen blotting), elektroforeza w żelach, spektrometria mas. Zielone białko fluoryzujące jako znacznik ekspresji genu.
W trakcie zajęć laroratoryjnych realizowane są następujące zagadnienia:
Izolacja plazmidowego DNA z hodowli bakteryjnych.
Trawienie plazmidowego DNA enzymami restrykcyjnymi i analiza DNA w żelu agarozowym.
Izolacja kwasów nukleinowych z żelu agarozowego.
Ukompetentnianie bakterii. Transformacja bakterii plazmidowym DNA.
Izolacja DNA roślinnego metodą MICRO C-TAB.
Indukcja ekspresji genów w bakteriach rekombinowanych. Izolacja produktu ekspresji genu. Oczyszczanie białka rekombinowanego metodą chromatograficzną. Analiza poszczególnych etapów uzyskiwania białka rekombinowanego poprzez rozdział w żelu poliakrylamidowym.
Rodzaj przedmiotu
Tryb prowadzenia
Koordynatorzy przedmiotu
W cyklu 2023/24-Z: | W cyklu 2024/25-Z: | W cyklu 2022/23-Z: |
Efekty kształcenia
Wiedza:
Student omawia enzymy stosowane w inżynierii genetycznej, w tym enzymy restrykcyjne
Student wie, co to są mikromacierze DNA i jakie mają zastosowanie. Definiuje pojęcia: interferencja RNA, nokautowanie genu.
Student wymienia etapy klonowania i metody identyfikacji klonów rekombinantów. Omawia podstawowe wektory do klonowania: pBR322, fag λ , fag M13
Student podaje przykłady transgenicznych zwierząt i roślin i ich zastosowanie
Student omawia budowę i metody izolacji rekombinowanych wektorów
Student zna budowę wektorów ekspresyjnych i mechanizmy regulacji ekspresji genów
Student omawia mutagenezę ukierunkowaną
Student wymienia i charakteryzuje metody detekcji i analizy sklonowanych genów i ich produktów
Umiejętności:
Student potrafi wyizolować plazmidowe DNA z bakterii oraz genomowe DNA roślinne i wykonać trawienie restrykcyjne oraz elektroforezę w żelu agarozowym
Student potrafi oczyścić DNA z żelu agarozowego
Student umie ukompetentnić komórki bakteryjne, przeprowadzić transformację komórek plazmidowym DNA oraz wyizolować klony rekombinantów
Student potrafi wyizolować i oczyścić białko rekombinowane metodą chromatograficzną oraz monitorować poszczególne etapy uzyskiwania białka podczas elektroforezy w żelu poliakrylamidowym.
Student potrafi zaplanować eksperyment wymiany kluczowego aminokwasu we wskazanym białku używając metod biologii molekularnej
Kompetencje:
potrafi współpracować w grupie, dbać o bezpieczeństwo własne oraz innych osób przy pracy
Kryteria oceniania
wykład: zaliczenie w formie egzaminu pisemnego: do zdania egzaminu konieczne jest udzielenie poprawnych odpowiedzi na co najmniej 50% zagadnień poruszonych w pytaniach
laboratorium: zaliczenie z oceną: ustalenie oceny końcowej na podstawie ocen cząstkowych ze sprawdzianów ze znajomości podstaw teoretycznych dotyczących doświadczeń (70%), poprawności wykonania doświadczeń oraz aktywności na zajęciach (30%)
Literatura
Literatura podstawowa:
Berg M.J., Tymoczko J.L., Stryer L. Biochemia, PWN, Warszawa 2009
Buchowicz J. Biotechnologia molekularna, PWN, 2009
Bates AD., McLennan AG., Turner PC., White MRH., Biologia Molekularna, Krótkie wykłady, PWN, 2009
Nowak Z., Gruszczyńska J., Wybrane techniki i metody analizy DNA, SGGW, 2007
Turner P.C., McLennan A.G., Bates A.D., Biologia molekularna. Krótkie wykłady, M.R.H. White; PWN 2007
Baj J., Markiewicz Z., Biologia molekularna bakterii, PWN 2006
Literatura dodatkowa:
Sambrook J., Russel D.; Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Laboratory 2001
Rastogi S., Pathlak N.: Genetic engineering, Oxford University Press 2011
Howe C.: Gene cloning and manipulation, Cambridge University Press 2007
Publikacje polecane przez wykładowcę, pochodzące z Postępów Biochemii, Postępów Biologii Komórki, Postępów Mikrobiologii, Kosmosu
Więcej informacji
Dodatkowe informacje (np. o kalendarzu rejestracji, prowadzących zajęcia, lokalizacji i terminach zajęć) mogą być dostępne w serwisie USOSweb: